LAPORAN PERCOBAAN 8 (KROMATOGRAFI)

LAPORAN PRAKTIKUM

KIMIA ORGANIK I

"KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KOLOM"

 

DISUSUN OLEH:

ELDA SEPTIANA

(A1C117027)

DOSEN PENGAMPU

Dr. Drs. SYAMSURIZAL, M.Si.

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI

2019

VII. Data Pengamatan

7.1 Kromatografi Lapis Tipis

No.	Perlakuan	Hasil Pengamatan
1.	Disiapkan plat TLC	Plat TLC di potong dengan panjang 5 cm dan lebar 3 cm, lalu diberi garis pinggir 0,5 cm
2.	Dibuat larutan pengembang	N-heksan : Etil Asetat dengan perbandingan 2 : 1
3.	Dibuat larutan sampel dan diekstrak dengan 5 mL Etanol	Sampel terdiri dari 10 buah tanaman yaitu buah naga, bayam, nanas, bunga kertas, semangka, wortel, pepaya, kentang, tomat, kembang sepatu
4.	Ditotolkan sampel pada plat TLC dan dikeringkan lalu dimasukkan kedalam larutan pengembang  lalu dilihat noda dengan lampu UV	Pada plat pertama  didapat jarak pelarut yaitu 4,8 cm dan digunakan 4 buah sampel yang ditotolkan yaitu buah naga dengan jarak 3,9 cm ; bayam dengan jarak 0,3 cm ;  nanas dengan jarak 3,8 cm ; dan bunga kertas dengan jarak 2,5 cm. Pada plat kedua didapat jarak pelarut yaitu 4,5 cm juga digunakan 4 buah sampel yang ditotolkan yaitu semangka dengan jarak noda 3,7 cm ; wortel dengan jarak 3,9 cm ; pepaya dengan jarak 3,8 cm dan kentang dengan jarak 0 cm. Pada plat ketiga didapat jarak pelarut yaitu 4,7 cm dan digunakan 2 buah sampel terakhir yaitu tomat didapat jarak noda sejauh 4,1 cm ; dan kembang sepatu dengan jarak 4 cm.

7.2 Kromatografi kolom

No.	Perlakuan	Hasil Pengamatan
1.	Disiapkan sampel	Digunakan sampel yang sama seperti kromatografi lapis tipis
2.	Disiapkan kolom	Disumbat kolom dengan kapas, dimasukkan silica gel (fase diam) kedalam larutan n-heksan lalu dimasukkan ke dalam kolom kromatografi sambil di ketuk-ketuk agar kolom menjadi padat
3.	Dimasukkan sampel	Dicampur sampel dengan silica gel sekitar 1 sudip lalu dimasukkan kedalam kolom kromatografi
4.	Dialirkan kolom dengan pelarut	Untuk campuran pelarut yang digunakan itu bermacam-macam untuk setiap sampel sesuai dengan sifat dari sampel tersebut polar, semipolar atau nonpolar
5.	Ditampung tetesan yang keluar dari kolom	Tetesan yang keluar di tampung kedalam botol yang berbeda-beda untuk setiap smapel yang didasarkan pada perbedaan warna yang keluar.

VIII. Pembahasan

Prinsip yang digunakan dalam kromatografi yaitu dalam suatu komponen penyusun suatu zat terletak di dalam perbedaan afinitas atau yang sering disebut gaya adesi dari jenis analit terhadap fasa diam (stasioner) dan fasa gerak (mobile) sehingga masing-masing komponennya akan terpisah satu sama lain. Afinitas analit bergantung kepada daya adsorpsinya terhadap fasa diam. dan kelarutan analit tersebut terhadap fasa gerak yang digunakan. Semakin kuat adsorpsinya terhadap fasa diamnya dan kelarutannya yang kecil pada fasa geraknya maka lebih lama berdiam di dalam kolom, begitupun sebaliknya (http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/).

Sampel yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis maupun kromatografi kolom yaitu ekstrak buah naga, bayam, nanas, bunga kertas, semangka, wortel, papaya, kentang, tomat dan bunga sepatu. Percobaan yang kami lakukan pertama adalah kromatografi kolom kemudian hasil dari kromatografi kolom nantinya akan diuji dengan kromatografi lapis tipis.

8.1 Kromatografi Kolom

            Kromatografi kolom adalah teknik pemisahan berdasarkan pada percobaan saya adsorpsi pada suatu adsorben tertentu terhadap suatu senyawa baik pengotor maupun senyawa hasil isolasi. Pada percobaan ini fase diam yang digunakan adalah silica gel (asam silikat). Silica gel hampir dapat memisahkan semua zat dalam suatu cuplikan. Silica gel ini bersifat aktif dan efek pemisahannya berupa adsorpsi dan partisi. Silica gel merupakan suatu adsorben yang bersifat polar. Jadi, cuplikan akan ditahan berdasarkan pada perbedaan kepolarannya.

            Sebelum dilakukan percobaan terlebih dahulu disiapkan kolom yang akan digunakan. Kolom dibersihkan dengan air biasa kemudian dibilas dengan n-heksan supaya kotoran-kotoran yang berada di dinding kolom hilang. Kemudian kolom disumbat dengan kapas dibagian bawah kolom. Alasan mengapa harus disumbat dengan kapas yaitu agar sampel dan larutan yang akan diuji tidak turun dari dalam kolom. Setelah itu dibuat fase diam yaitu bubur silica gel yang dibuat dengan cara mencampurkan beberapa gram silica gel dengan campuran n-heksan dan etil asetat. Setelah bubur silica gel siap, maka dituangkan ke dalam kolom hingga setengah kolom sabil dipukul-pukul perlahan permukaan kolomnya agar silica gelnya dapat memadat sempurna.

            Kemudia di wadah lain disiapkan sampel dari masing masing ekstrak yaitu dengan cara mencampurkan satu sudip serbuk silica gel dengan beberapa tetes sampel yang akan digunakan. Diaduk hingga kering. Lalu dimasukkan ke dalam kolom dengan hati-hati dan diratakan dengan lidi. Setelah sampel dimasukkan ke dalam kolom dilanjutkan dengan memasukkan fase feraknya berupa n-heksan dengan etil asetat dengan perbandingan yang dibutuhkan. Eluen dilairkan dsecara perlahan sedikit demi sedikit sampai sampel turun melewati kolom. Dari percobaan yang dilakukan maka diperoleh hasil sebagai berikut.

a.    Buah naga

Eluen yang digunakan adalah n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 8:1, 16:2, 15:5. Dengan segala perbandingan eluen yang digunakan sampel buah naga turun hanya sedikit demi sedikit tidak sampai keluar kolom hingga waktu praktikum berakhir. Lautan yang dihasilkan yaitu  4 botol larutan dengan warna keseluruhannya bening atau tidak berwarna.

b.    Bayam

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dengan etil asetat dengan perbandingan 5:10, diperoleh 5 botol larutan yang turun dari kolom. Dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 berwarna hijau, botol 3 hijau puda, botol 4 tidak berwarna dan botol ke 5 juga tidak berwarna.

c.    Nanas

Eluen yang digunakan yaitu kloroform dan methanol dengan perbandingan 3:1. Diperoleh larutan yang turun dari kolom sebanyak 3 botol. Dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 sedikit keruh, dan botol 3 tidak berwarna.

d.   Bunga Kertas

Eluen yang digunakan yaitu kloroform saja tanpa campuran. Diperoleh 5 botol larutan. Dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 tidak berwarna namun sedikit ada seperti minyak, botol 3 sedikit keruh, botol 4 tidak berwarna, dan botol 5 juga tidak berwarna.

e.    Semangka

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 3:2, sampel langsung turun dari kolom dan dihasilkan larutan sebanyak 3 botol. Dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 kuning pudar, dan botol 3 tidak berwarna.

f.     Wortel

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 3:2, dan sampel langsung turun keluar kolom. Diperoleh 3 botol larutan dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 kuning pudar dan botol 3 tidak berwarna.

g.    Pepaya

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 3:2. Diperoleh 4 botol larutan, dimana botol 1 Tidak berwarna (sampel belum turun), botol 2 sedikit kekuningan (Sampel turun), botol 3 dan 4 tidak berwarna.

h.    Kentang

Eluen yang digunakan yaitu kloroform dan methanol dengan perbandingan 3:1. Diperoleh 4 botol larutan, dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 kuning pudar, botol 3 dan 4 tidak berwarna.

i.      Tomat

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 3:1. Diperoleh 3 botol dari larutan yang turun. Dimana botol 1 tidak berwarna, botol 2 kemerahan, dan botol 3 tidak berwarna.

j.      Bunga sepatu

Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 3:1. Diperoleh 3 botol larutan, dimana botol 1 tidak berwarna,botol 2 dan 3 berwarna keruh.

       Larutan dalam botol-botol tersebut akan diuji menggunakan kromatografi lapis tipis. Keuntungan dari kromatografi kolom yaitu dapat digunakan untuk analisa data dan aplikasi prevaratiy digunakan untuk analisa data dan menentukan jumlah komponen campuran dan digunakan untuk pemisahan dan verivikasi substansi. Sedangkan kerugian dari kromatografi kolom ini yaitu mempersiapkan kolom dibutuhkan kemampuan teknik yang sesuai dan membutuhkan waktu yang cukup lama.

8.2 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis adalah salah satu analisis kualitatif dari suatu sampel yang ingin dideteksi dengan memisahkan komponen-komponen sampel berdasarkan tingkat kepolarannya. Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu jenis kromatografi yang menggunakan plat TLC. Adapun prinsip kerjanya adalah berdasarkan adsorpsi dan partisi dimana sampel akan berpisah berdasarkan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan. Fase diam yang digunakan yaitu plat TLC. Sedangkan fase geraknya yaitu n-heksan dan asam asetat. Tahap pertama yang dilakukan yaitu menyiapkan plat TLC dan bejana. Plat TLC dipotong selebar 5 cm x 3 cm. Kemudian deberi tanda batas pada kedua ujung atas dan bawah dengan menggunakan pensil sebesar 0,5 cm. Eluen yang berupa n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 2:1 dijenuhkan terlebih dahulu di dalam chamber. Alasan mengapa eluen harus dijenuhkan yaitu agar tekanan dalam chamber sama serta agar noda yang dihasilkan sesuai dengan yang diinginkan. Setiap sampel yang akan dianalisis di totolkan dengan menggunakan pipa kapiler di plat TLC. Setiap plat terdiri dari 4 titik sampel. Dimana sampel yang ditotolkan masing-masing diberi tanda yaitu:

a.       Buah naga                   f. Wortel

b.      Bayam                         g. Pepaya

c.       Buah naga                   h. Kentang

d.      Bunga kertas               i. Tomat

e.       Semangka                    j. Bunga sepatu

Setelah sampel ditotolkan plat TLC diletakkan diatas fase gerak diamati samapai sampel bergerak menuju ke tanda batas atas dari plat TLC. Setelah sampel sudah berada pada tanda batas untuk lebih jelasnya digunakan lampu UV untuk melihatnya. Sehingga berdasarkan percobaan pertama ini didapatlah :

a.    Buah naga

Untuk sampel buah naga dalam kromatografi lapis tipis diperoleh pengamatan yaitu yang bergerak hanya crutnya saja sedangkan totolan sampel tidak bergerak. Eluen yang diguankan yaitu n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 2:1

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,8125

b.    Bayam

Sampel bayam dalam kromatografi lapis tipis diperoleh pengamatan yaitu hanya sedikit pergerakan. Jarak yang ditempuh senyawa sebesar 0,3 cm sedangkan jarak yang ditempuh pelarut yaitu 4,8 cm. Eluen yang digunakan sama dengan sebelumnya.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,0625

c.    Nanas

Eluen yang diguanakan untuk kromatografi sampel nanas ini sama dengan percobaan sebelumnya. Hasil pengamatan yang diperoleh yaitu sedikit pergerakan dari sampel.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,7916

d.   Bunga Kertas

Untuk bunga kertas eluen yang digunkan berbeda dari sebelumnya yaitu dengan menggunakan methanol 100% tanpa campuran apapun. Setelah diuji crut bergerak, sehingga nilai Rf-nya sebesar:

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,5208

e.    Semangka

Untuk menguji sampel semangka digunakan eluen n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan sebesar 1:0,5. Crut bergerak dari plat TLC dengan menunjukkan warna kuning.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,82

f.     Wortel

Hasil pengamatan dari sampel wortel yaitu dengan menunjukkan crut yang bergerak dengan noda berwarna kuning. Untuk totolan 1 terdapat warna namun tidak bergerak, totolan 2 tidak terdapat apa-apa, dan totolan 3 sama dengan totolan 1. Eluen yang digunakan sama dengan eluen sampel semangka.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,86

g.    Pepaya

Hasil yang dieproleh yaitu crut bergerak dengan menunjukkan warna orange. Untuk totolan 1 terdapat noda digaris berwarna cream pudar, totolan 2 bergerak dengan menunjukkan warna cream, totolan 3 tidak bergerak namun menunjukkan noda warna cream pudar pula.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 84

h.    Kentang

Untuk hasil pengamatan yang diperoleh dari kentang yaitu tidak ada pergerakan disemua noda namun terdapat warna noda hitam. Eluen yang digunakan sama dengan eluen yang digunakan sebelumnya yaitu n heksa dan etil asetat dengan perbandingan 1:0,5.

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0

i.      Tomat

Hasil pengamatan oleh sampel tomat yaitu noda dari botol 3 bergerak. Eluen yang digunakan yaitu n-heksan dengan etil asetat dengan perbandingan 3:1. Sehingga Rf ysng diperoleh yaitu:

Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,8723

j.      Bunga sepatu

Dari sampel bunga sepatu crut tidak bergerak tetapi menghasilkan warna cream pudar. Dengan           jarak yang ditempuh senyawa yaitu 4 cm, sedangkan jarak pelarut yaitu 4,7 cm.

    Rf = Jarak yang ditempuh senyawa/jarak yang ditempuh pelarut = 0,851

Nilai Rf sangatlah karakteristik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran yang rendah, begitu pula sebaliknya. Hal ini dikarenakan fase diam bersifat polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fase diam. Sehingga, menghasilkan Rf yang rendah. Rf dalam kromatografi lapis tipis yang bagus berkisar antara 0,2-0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi kepolaran dari eluen. Sebaliknya jika Rf terlalu rendah, maka kepolaran dari eluen harus ditambahkan.

Kelebihan dari kromatografi lapis tipis yaitu perenggangannya lebih cepat, murah, dan mudah digunakan. Sedangkan kekurangan dari kromatografi lapis tipis adalah hasilnya kurang akurat, lebih akurat menggunakan metode kromatografi kolom dari pada kromatografi lapis tipis.

IX. Kesimpulan

            Dari percobaan yang telah kami lakukan maka dapat ditarik kesimpulan yaitu:

1.  Pada kromatografi lapis tipis bahan penjerap dilekatkan tersebar pada plat kaca, aluminium ataupun plastic. Dibandingkan dengan teknik kromatografi lainnya, metode lapis tipis memiliki kelebihan yaitu pengerjaannya yang lebih cepat, kebutuhan bahan dapat disesuaikan dengan keperluan dan pemisahannya baik. Sedangkan pada kromatografi kolom merupakan teknik penting untuk pemisahan skala preparative, dari beberapa milligram sampai puluhan gram. Campuran yang akan dipisahkan dimasukkan di bagian atas timbunan penjerap dimana campuran ini semua terjerap.

2.    Azas penting dari kromatografi adalah bahwa senyawa yang berbeda mempunyai koefisien            distribusi yang berbeda diantara kedua fase. Senyawa yang berinteraksi lemah dengan fase diam akan lebih lama tinggal dalam fase gerak dan bergerak cepat dalam sistem kromatografi

3.    Identifikasi senyawa dilakukan dengan menghitung dan membandingkan harga Rf (Retardarion      Factor) semua zat yang terpisah dengan Rf zat autentik.

Rf =

X. Pertanyaan

1. Mengapa digunakan Silica gel sebagai fase diam dalam kromatografi kolom?

2. mengapa kolom yang digunakan harus disumbat dengan gelas wall atau kapas?

3.      Mengapa eluen yang digunakan garus dijenuhkan dalam chamber?

XI. Daftar Pustaka

Bresnick, S M. 2004. Intisari Kimia Organik. Jakarta: Hipotekes.

Chang. 2009. Kimia Analitik. Bandung: ITB.

Khopkar. 2009. Kromatografi. Yogyakarta: Graha Ilmu.

Syamsurizal. 2019. Teknik Pemisahan dengan Kromatografi. http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan khromatografi/. diakses pada tanggal 12 April 2019 pukul 16:30. 

Tim Kimia Organik. 2016. Penuntun Praktikum Kimia Organik. Jambi: Universitas Jambi.

XII. Lampiran

Sampel yang digunakan

Penjenuhan Eluen

Kromatografi kolom sampel buah naga

Silika gel